XLD - SS

CONSERVACION DE LOS MEDIOS

OCURRE QUE ALGUNOS MEDIOS DE CULTIVO, SEGÚN SU CONSTITUCIÓN SE DESHIDRATAN MAS ACELERADAMENTE, ES EL CASO DEL XLD, Y EL AGAR SS, LO IDEAL SERIA SOLO PREPARAR SEGÚN LA ESTADÍSTICA DE CADA LABORATORIO, LA CANTIDAD DE MEDIOS DE ESTE TIPO SOLO PARA UNA O DOS SEMANAS, POR SUPUESTO QUE PREPARAR PEQUEÑOS LOTES SIGNIFICA MAYOR TRABAJO Y COSTOS PARA EL LABORATORIO. UNA MANERA DE EVITAR TRABAJAR MAS Y AHORRAR YA QUE SE HARÍA MAYOR CANTIDAD DE MEDIOS, ES PREPARAR LA CANTIDAD SUFICIENTE DE MEDIO POR PLACA EN TUBOS CON ROSCA DE BAQUELITA, SE CONSERVA EN NEVERA O A TEMPERATURA AMBIENTE POR MUCHOS MÁS TIEMPO. PARA EL MOMENTO DE NECESITARLO SÓLO SE FUNDEN AL CALOR Y SE VIERTEN EN LAS PLACAS, SI UD USA ESTOS MEDIO EN PLACAS DIVIDIDAS, LA PROPORCIÓN SON 10 ML POR TUBO DE CADA UNO, Y SE RECOMIENDO QUE SEA MINIMO EN TUBOS DE 100 X 10 Ó 150 X 10 CMS, LO QUE ES LO MISMO 15 X 1 Ó 10 X 1 mm

DNASA AGAR

SI TIENEN EN EL LABORATORIO EL MEDIO DE CULTIVO DNASA (PARA ESTAFILOCOCO), Y NO CONTIENE INDICADOR (GENERALMENTE VERDE DE METILO), SÓLO SE LO DEBEN ADICIONAR A UNA PROPORCIÓN DEL 0.005% SE ESTERILIZA Y LISTO, PUEDE OCURRIR QUE TENGA EL MEDIO PERO TAMPOCO TENGAN EL INDICADOR, NO HAY ROLLO LO PREPARAN COMO INDICA EL ENVASE, LO VIERTEN EN LAS RESPECTIVAS PLACAS, LUEGO HACEN LA SIEMBRE DEL MATERIAL A EVALUAR Y DESPUÉS DE 24 HORAS DE INCUBACIÓN VAN A AGREGAR A LA PLACA HCL AL 0.1 N, CERCA AL DESARROLLO DE SER POSITIVO QUEDARÁ TRANSLUCIDO Y EL RESTO DEL MEDIO OPACO.

DESCONTAMINACION, ESTERILIZACION LAVADO

LIMPIEZA DE MATERIAL USADO

LIMPIEZA DEL MATERIAL QUE SE USÓ EN EL DIAGNOSTICO MICROBIOLÓGICO: CUANDO LLEGA AL ÁREA DE LIMPIEZA O LAVADO, SE SEPARA SEGÚN SEA, DE DESCARTE O REUSABLE, ESTOS SE COLOCAN EN ENVASES CERRADOS O EN BOLSAS PLÁSTICA, SE UBICAN DENTRO DEL AUTOCLAVE, Y SE ENCIENDE EL EQUIPO LUEGO DE HABER CERRADO LA TAPA DEL MISMO, SE ESPERA QUE CALIENTE CON LA VÁLVULA DE ESCAPE O DE SEGURIDAD ABIERTA, ESTO CON EL FIN DE QUE SE SUSTITUYA EL AIRE FRÍO POR EL VAPOR, CUANDO OBSERVAMOS QUE COMENZÓ A SALIR VAPOR POR LA VÁLVULA, CERRAMOS ESTA Y ESPERAMOS QUE LLEGUE A 121 ºC, 15 LIBRAS DE PRESIÓN Y EN ESE PRECISO MOMENTO COMENZAMOS A TOMAR EL TIEMPO DE 15 MINUTOS (ES IMPORTANTE RECORDAR QUE NO SON 15 MINUTOS EN EL AUTOCLAVE, SON 15 MINUTOS A 121 ºC Y 15 LIBRAS DE PRESIÓN) LUEGO DE PASADO LOS 15 MINUTOS SE ABRE LA VÁLVULA DE SEGURIDAD O ESCAPE Y ESPERAMOS QUE EL EQUIPO PIERDA LA PRESIÓN HASTA LLEGAR A 0 LIBRAS, EN ESE MOMENTO SE ABRE LA TAPA Y SE SACA EL MATERIAL, DESPUÉS DE ESTO EL MATERIAL DE PLÁSTICO O DESECHABLE SE DESCARTA Y SE PROCEDE AL LAVADO DE LA CRISTALERÍA CON JABÓN LÍQUIDO, pH NEUTRO, NO BACTERICIDA, SE ENJUAGA CON AGUA DE CHORRO Y POSTERIORMENTE CON AGUA DESTILADA, SE DEJA SECAR A TEMPERATURA AMBIENTE PARA POSTERIORMENTE ESTERILIZARLO O ALMACENARLO SEGÚN SEA EL CASO, A ESTE MATERIAL SE LE HACE CONTROL DE CALIDAD AGREGÁNDOLE UNA SOLUCIÓN DE AZUL DE BROMOTIMOL AL 0.005 % DISUELTO EN ALCOHOL ETÍLICO, POR LAS PAREDES DEL ENVASE, SI HAY UN VIRAJE DE COLOR SE LAVA NUEVAMENTE LA CRISTALERÍA YA QUE ESTO INDICARÍA QUE EL pH NO ES NEUTRO, LUEGO DE ESTÉRIL LA CRISTALERÍA EN HORNO PASTEUR A 180 ºC DURANTE 2 HORAS, SE LE HACE UN CONTROL VERTIENDO EN ELLOS UN MEDIO DE CULTIVO DE USO GENERAL TRIPTICASA SOYA AGAR, MUELLER HINTON, ETC), SE INCUBA Y A LAS 24 HORAS NO DEBE HABER DESARROLLO MICROBIANO, SI LO HAY SE DEBE ESTERILIZAR NUEVAMENTE TODO EL LOTE.

AUTOCLAVE

Placas de Petri con medios

Las Placas

En la práctica diaria en algunos laboratorios se usan placas divididas, en estas se colocan medios de cultivo diferentes los cuales son usados casi siempre para un fin común, por ejemplo; agar salado manitol y DNASA Agar (estafilococos), Agar XLD y SS Agar (coprocultivo), estas se incuban igual y se descartan igual al mismo tiempo, que no se debe hacer?, por ejemplo en la placa dividida tenemos agar sangre y agar EMB Levine, llega una muestra para la cual sólo necesito por ejemplo el Agar angre (faríngeo), se siembra y se incuba, que ocurre? Después de 24 horas a 35 grados los medios pierden humedad por esa razón para una siembra posterior no se debe usar el medio de EMB Levine que tenemos en la placa ya que como dije perdió humedad y ya no estría optimo para el cultivo microbiológico.

En las placas de Petri sencillas generalmente se vierten 20 ml de medio de cultivo, y en las dobles 10 ml por lado, esta cantidad permite un grosor aproximado de 4 milímetro de espesor, mismo que a su vez dependiendo si la placa es plástica o de vidrio, tendrá un periodo de vida útil de entre dos y tres semanas, después de este tiempo y dependiendo de las condiciones de almacenamiento las placas comienzan a deshidratarse, no siendo bajo ninguna circunstancia recomendado su uso, ya que, el nivel de humedad óptimo para el desarrollo microbiano se verá bastante disminuido. Nada se logra adicionándole más medio a la placa porque de igual manera después del tiempo mencionado se deshidratan.

           

Agar Noble

Agar para electroforesis

           Quizá a algunas personas les pase que al momento de preparar algún medio de cultivo al cual le deben agregar agar (generalmente cuando se preparan medios por fórmula), ocurre que este no gelifica, las razones de esto pueden ser múltiples, entre ellas se puede mencionar, mal cálculo, excesivo calentamiento, agar desnaturalizado, pH incorrecto, y uno que es poco sabido es la pureza del agar, para preparar medios de cultivo deben fijarse que, el agar no diga NOBLE, el NOBLE es un agar extra puro con un punto de gelificación diferente al agar de uso en medios de cultivo, este se recomienda para pruebas de electroforesis

Deshidratación de los medios de cultivo

La vida útil del medio de cultivo ya en placa (de vidrio), es entre dos y tres semanas a temperatura adecuada, este tiempo aumenta hasta a cuatro semanas si usan placas descartables, esto debido a la manufacturación de estas placas, las de vidrio no tienen un buen acabado en los bordes superiores de las cajas, evitando así que el cerrar sea deficiente, no ocurriendo así con las descartables, que al cerrar mejor evitan más efectivamente la perdida de humedad.